TINCIÓN DE GRAM
PRÁCTICA 3.º (3.º EVALUACIÓN): TINCIÓN DE GRAM
Objetivo:
Se utiliza para la observación de microorganismos, con la ayuda de una tinción (una coloración) de los distintos microorganismos.
Fundamento:
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos gram positivos no se decoloran, mientras que los gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células gram negativas son rojas, mientras que las gram positivas permanecen violetas.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias gram negativas. Al término del protocolo, las gram positivas se verán azul-violáceas y las gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de tratarlos con un decolorante, y el color no se modifica al añadir éste; otros pierden con facilidad el primer tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se califican de gram positivos, y los que pierden la primera coloración y retienen la segunda, de gram negativos. Basándonos pues, en la reacción gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos. Los colorantes de p-rosanilina son los que mejores resultados dan en la coloración gram. Los representantes más usados de este grupo son violeta de metilo y violeta cristal o de genciana. En realidad, violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina.
Colorantes:
1- Cristal violeta o violeta de genciana
2- Lugol
3- Alcohol acetona
4- Safranina o fucsina básica
Procedimiento:
Primeramente se siembra inóculo en un porta, si el inóculo ha sido sembrado en un medio sólido primero se añade al porta una gota de suero sódico.
Se siembra en el porta formando una zona rectangular y extendiéndolo correctamente.
Y se calienta con el mechero busner a una altura adecuada, para que los microorganismos queden bien impregnados.
Luego se procede a echar todos los colorantes, en el orden puestos anteriormente.
Éstos tienen que estar 1 minuto en el porta para que se fijen, menos el alcohol cetona que se retirará antes de los 40 segundos.
Se retira con agua destilada, las veces que sean suficientes, hasta que veamos que se ha perdido el liquido del colorante.
Una vez hecho todos los pasos se deja secar, y posteriormente se lleva al microscopio.
Objetivo:
Se utiliza para la observación de microorganismos, con la ayuda de una tinción (una coloración) de los distintos microorganismos.
Fundamento:
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos gram positivos no se decoloran, mientras que los gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células gram negativas son rojas, mientras que las gram positivas permanecen violetas.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias gram negativas. Al término del protocolo, las gram positivas se verán azul-violáceas y las gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de tratarlos con un decolorante, y el color no se modifica al añadir éste; otros pierden con facilidad el primer tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se califican de gram positivos, y los que pierden la primera coloración y retienen la segunda, de gram negativos. Basándonos pues, en la reacción gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos. Los colorantes de p-rosanilina son los que mejores resultados dan en la coloración gram. Los representantes más usados de este grupo son violeta de metilo y violeta cristal o de genciana. En realidad, violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina.
Colorantes:
1- Cristal violeta o violeta de genciana
2- Lugol
3- Alcohol acetona
4- Safranina o fucsina básica
Procedimiento:
Primeramente se siembra inóculo en un porta, si el inóculo ha sido sembrado en un medio sólido primero se añade al porta una gota de suero sódico.
Se siembra en el porta formando una zona rectangular y extendiéndolo correctamente.
Y se calienta con el mechero busner a una altura adecuada, para que los microorganismos queden bien impregnados.
Luego se procede a echar todos los colorantes, en el orden puestos anteriormente.
Éstos tienen que estar 1 minuto en el porta para que se fijen, menos el alcohol cetona que se retirará antes de los 40 segundos.
Se retira con agua destilada, las veces que sean suficientes, hasta que veamos que se ha perdido el liquido del colorante.
Una vez hecho todos los pasos se deja secar, y posteriormente se lleva al microscopio.
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