PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Placas de petri o tubos

Recipiente con rosca

PRÁCTICA 1.º (3.º EVALUACIÓN): PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Objetivo:
Crear un medio natural o artificial que con sus nutrientes y condiciones físico-químicas favorezcan el crecimiento de microorganismos

Fundamento:
El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente.  Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales  y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.


Medios de cultivo:

Microorganismos     y    Medio

Aerobias mesófilas: PCA (37ºC)
Coliformes totales: Endo Agar (37ºC)
Coliformes fecales: McConkey (44ºC)
Enterococos y enterobacterias: Levine (37ºC)             

Instrumentos:
Compuesto para el medio
Agua destilada
Vidrio de reloj
Pipeta

Procedimiento:
Primeramente, hay que saber que los medios se preparan siguiendo las indicaciones que da el fabricante, en el bote.
Se realiza la mezcla de la cantidad indicada que indica, habiéndolo pesado en el peso con el vidrio de reloj y se mezcla con agua destilada. Se agita para que quede bien mezclado.
Tras la mezcla se mete el frasco de rosca en el microondas (sin la tapa) y se retira antes de que empiece a hervir.
Después se mete en el autoclave para proceder a la esterilización de los medios, a excepción de que sea en tubo, ya que primero se deposita en los tubos y éstos son los que se meten en el autoclave.
El frasco de rosca en el autoclave se mete sin estar cerrado del todo, la rosca se deja abierta 1/4 de vuelta.
La opción del autoclave siempre será 120ºC-21 min.
Una vez que el autoclave ha terminado, se sacan los frascos y tubos y se dejan enfriar, lo necesario, y se empiezan a distribuir antes de que se enfríe por completo y se solidifique.
En esta parte de la preparación de cultivos es necesario trabajar en condiciones completas de esterilidad.
En nuestro caso hemos trabajado con el mechero busner.
Se flamea la boca del frasco siempre antes de despositar el medio en la placa petri, y esta solo se abre en el momento de depositar el medio, se cierran y se dejan que se solidifiquen (siempre rotuladas, con la fecha y el nombre del medio). Una vez que se ha solidificado, la placa petri se guarda invertida.